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血清实验方法原理

发布时间:2020-05-25   点击次数:119次
实验方法原理
 不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长。检测不同批次的血淸,然后大批量购买血清不仅能节约经费且能减少实验条件引起的差异,某些批次血清可能含有毒性或抑制生长的化合物。
 
实验步骤
1) 从不同生产厂商得到 100ml 的批次的试验血清。
 
2) 用本实验室常用的 2~3 种细胞来检测血清。
 
3) 将 lml 含有 20% 的上述待检血清的培养液加于 9 个培养皿中(35-mm), 每种批次的血清用 9 碟细胞培养皿进行检测。
 
4)9 碟中每 3 碟接种入 500、1000、2000 个细胞。如果细胞存活率较高,细胞数可降低。细胞不必长满,但应长到形成足够密度的单个克隆。细胞应在不含血清的培养液屮稀释,以免残留血淸遗留在现有的培养液中。细胞应加至体积为 1 ml 以便血清终浓度为 10%。现用的血清作为该方案的内标。
 
5) 配制 80 ml 含待检血清浓度为 10% 的培养液。用该培养液每周给细胞换液两次,共两周。克隆在此期间应较明显。
 
6) 进行克隆染色,比较不同批次血清的克隆数。克隆的染色用 1xPBS 漂洗,沥干 PBS 后,加人 2 ml 的 Wright 染液(Fisher Scientific),室湿染色 8 分钟后,加人 2 ml 水, 室温放置 10 分钟后用水漂洗,观察克隆的数量和大小。
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