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PCR试剂盒的使用注意事项有哪些

发布时间:2022-11-25   点击次数:170次
  PCR即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
  PCR试剂盒是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增一定长度的DNA段。可用于基因分离克隆,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面,且价格合适。
  PCR试剂盒的使用注意事项有哪些:
  注意事项一:保存
  未拆封的试剂盒,请于-20℃保存;拆封之后,应在4℃保存。
  在试剂消耗量较少的实验室,可以考虑将按照组分单独分装,后保存在-20℃。
  注意事项二:配置
  试剂盒内所含各组份都是混合物,在静置情况下会发生分层现象,因此,现配现用,震荡混匀,避免反复冻融,避免预混。其中,反复冻融将大幅缩短使用寿命。
  在扩增体系的选择时,尽量选择标准体系,再根据检材情况加入模板,之后切勿忘记以PCR用水补足扩增体系。
  注意事项三:切勿预混
  因试剂盒中酶的活性较高,将各组份按照比例混合之后,即使没有达到它的较适温度,但也可能发生与引物结合,导致实验结果出现丢位点或者杂合子纯化等情况。
  注意事项四:阴阳性参照
  实验结果会受提取、扩增和电泳等多个环节的影响,因此,每次扩增实验都应该添加一组阴阳性参照。这样,当结果异常的时,我们就可以结合阴阳性参照的表现,排查问题出在哪个环节。
  注意事项五:阳性参照是否通用
  虽然多数试剂盒的阳性参照都是007,但是案件试剂盒和建库试剂盒的阳性参照浓度不同,通常来说案件试剂盒的浓度更低。
  注意事项六:扩增程序
  扩增程序是能够将试剂盒更大效能发挥出来而设计,切勿随意更改;再者,不同试剂盒所含酶的升温模式也有不同,因此,在设置扩增程序时,要选择对应的升温模式。
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