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禽白血病是什么?

发布时间:2020-05-13   点击次数:70次

禽白血病病毒(ALV)属反转录病毒科,C型肿瘤病毒属禽白血病/肉瘤病毒群。并分为ABCDE 5个亚群。A亚群是常见的,而且与淋巴白血病最密切相关。B亚群在鸡群中偶然也可别离到。但是cD亚群则十分罕见。E亚群是常见的内源性白血病病毒,它曾经病毒基因方式长久地与宿主细胞DNA结合在一起,简直与肿瘤构成无关,其致病性也很低。各亚群病毒都具有一起的群特异性(gs)抗原,这种抗原能够从鸡蛋的卵清中、鸡体的各种安排中以及体液中检测到。

此外,从几个种类的野鸡中别离到的禽白血病病毒归属于F和G亚群。它们与从鸡中别离到的白血病病毒不同。从匈牙利鹧鸪中别离到的内源性病毒归属于H亚群,从 Gambel鹌鹑中别离的内源性病毒归属于I亚群。许多禽白血病/肉瘤病毒实验室毒株通常是缺点型的和缺少囊膜基因,它们的繁衍需求依靠它们亚群中的辅佐白血病病毒。

禽白血病病毒(ELISA法)检测试剂盒

本试剂盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的检测。 本试剂盒是采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)原理来检测禽白血病病毒的P27抗原。检测时,在相应的反应孔中加入阴、阳对照品和待测样品,经温育后,若样品中含有P27抗原,则与酶标板上的抗体结合形成抗原抗体复合物,反之则不能结合。洗涤后,加入的酶标记物与包被板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再次洗涤后加入底物,酶催化底物反应呈现蓝色,颜色深浅与样品中P27抗原的含量成正相关,从而达到快速检测的目的。

操作方法

一:试剂配制

a)0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:准确称取氯化钠 8.0 g、氯hua钾 0.2 g、磷酸氢二钠1.14 g和磷酸二氢钾0.24 g,加入去离子水溶解并定容至1 L。

b)洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(*在37℃恒温培养箱中加热5-10 min),然后用蒸馏水作25 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 720 mL 蒸馏水)匀,稀释好的洗涤液2-8℃可存放7日。

二:样品处理

蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子:取棉签于待检鸡只泄殖腔取样,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/L,pH 值 7.4)中,-20℃以下冰箱中冻融一次,待其恢复至室温后,取 100 μL 进行检测。 疫苗:疫苗稀释液将疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀释10-20倍后,取100μL进行检测。 胎粪:无需稀释,可以直接用于检测,若样品中含有沉淀或杂质,需在2000-3000 r/min,离心 10 min,取 100 μL 上清进行检测。

三:操作步骤

取酶标板(根据样品*,可拆开分次使用),阴性对照、阳性对照和待检样品各取100 μL加至相应微孔中,盖好盖板膜,轻轻振荡酶标板10 s,充分混

匀,室温下(25±2℃)避光反应60 min。

注:阴、阳性对照各设2孔,待检样品设1孔。

甩掉孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300μL,震荡洗涤4次,每次30s 左右,在干净吸水纸上拍打去除残存洗涤液。 每孔加入100μL酶标记物工作液,盖好盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应60 min。 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2。 底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 μL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)反应15 min。

注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min内使用。

每孔加入终止液100μL,5 min内测定结果。

注:若终止液出现絮状结晶,可37℃加热,待其溶解后使用。

结果判定

在酶标仪上读各孔OD650nm值,计算出阴性对照孔OD均值NC和阳性对照孔OD均值PC。

注:NC值<0.200且0.500<PC值≤2.000,试验结果才有效。否则,应进行重复试验。

按照公式计算出S/P值:S/P=(SC-NC)/(PC-NC)。

注:SC为被检样品孔OD值。

如果S/P<0.17,说明样品中无禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P≥0.17,说明样品中有禽白血病病毒P27蛋白。

 

有效期

贮存方法: 2 - 8oC下贮存。

有效期: 12个月。

 

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