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禽流.感病毒H7亚型检测试剂盒

产品型号:

厂商性质:生产厂家

访问量:841

更新时间:2022-10-26

简要描述:

禽流.感病毒H7亚型检测试剂盒
本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测禽流.感病毒H7亚型,对禽流.感病毒引起的流感及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

详细说明:

禽流.感病毒H7亚型检测试剂盒

【包装规格】 25/& 50头/

【预期用途】

禽流.感病毒H7亚型检测试剂盒

本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测禽.流感病毒H7亚型,对禽.流感病毒引起的流感及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对禽流.感病毒H7亚型基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含禽.流感病毒H7亚型基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析禽.流感病毒H7亚型检测试剂盒

注:阴性对照为禽类基因组DNA,阳性对照为失去活性的禽.流感病毒H7亚型cDNA

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液样本,禽肉取肌肉或内脏样本,样本处理方法参照相关文献资料。

2.样本采集后应立即检测,若不能立即检测,应置于-80℃冷冻保存,避免反复冻融,用干冰或液氮运输。

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表()

RT-PCR反应液

15.0 μL

逆转录酶

2.0 μL

Taq

3.0 μL

(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4.PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

反应体积

25 μL

通道选择

FA.M通道采集禽.流感病毒H7亚型荧光信号

PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

4210分钟(min

1

预变性

953分钟(min

1

预扩增

955秒(s

5

5540秒(s

PCR扩增

955秒(s

40

5540秒(s

(此阶段结束时采集荧光信号)

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct≤35

2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

1阳性:标本检测结果Ct≤35或有明显指数增长期。

2)可疑:标本检测结果Ct值在3538范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在3538范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】

通道及检测结果

标本检测结果解释

FAM

+

标本检出禽流.感病毒H7亚型RNA

-

标本中未检出禽.流感病毒H7亚型RNA

【检验方法的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的*检出*可能会发生假阴性的结果。

2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 产品的*检出限为102 Copies/mL,产品CV≤5%





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