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禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒

产品型号:

厂商性质:生产厂家

访问量:54

更新时间:2020-04-09

简要描述:

【禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒 样本要求】

1.样品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

咽喉拭子,采取时要将拭子深入喉头及上颚裂来回刮3次~5次,取咽喉分泌液;将咽喉拭子放人盛有1.0 mL生理盐水的离心管中备用,应避免标本间交叉污染。

2.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃,避免反复冻融。

详细说明:

禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒

 

注:阴性对照为禽类动物基因组DNA,阳性对照为失去活性的AIV-H9N2病毒cDNA

禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒 样本要求】

1.样品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

咽喉拭子,采取时要将拭子深入喉头及上颚裂来回刮3次~5次,取咽喉分泌液;将咽喉拭子放人盛有1.0 mL生理盐水的离心管中备用,应避免标本间交叉污染。

2.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃,避免反复冻融。

禽流感病毒H9N2亚型检测试剂盒 检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

15.0 μL

逆转录酶

 2.0 μL

Taq

 3.0 μL

3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

    在上述制备好的PCR反应管中分别加入处理好的待测标本RNAμl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

    根据需要,在上述准备好的PCR反应管中分别加入阴性对照品以及阳性对照品各μl,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4. PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 

 

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集 AIV-H9荧光信号

HEX通道采集 AIV-N2荧光信号

 PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

42℃:10分钟(min

1

预变性

95℃:3分钟(min

1

预扩增

95℃:5秒(s

5

55℃:40秒(s

PCR扩增

95℃:5秒(s

40

55℃:40秒(s

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct≤35

2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

1阳性:标本检测结果Ct≤35或有明显指数增长期。

2)可疑:标本检测结果Ct值在3538范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在3538范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】

通道及检测结果

标本检测结果解释

FAM

HEX

+

+

样本中检测出AIV-H9和AIV-N2

+

-

样本中检测出AIV-H9,未检测出AIV-N2

-

+

检测出AIV-N2,未检测出AIV-H9。

-

-

未检测出AIV-H9和AIV-N2。

【检验方法的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的检出限时可能会发生假阴性的结果。

2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 产品的检出限为10Copies/mL,产品CV≤5%

 

注:阴性对照为禽类动物基因组DNA,阳性对照为失去活性的AIV-H9N2病毒cDNA

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.样品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

咽喉拭子,采取时要将拭子深入喉头及上颚裂来回刮3次~5次,取咽喉分泌液;将咽喉拭子放人盛有1.0 mL生理盐水的离心管中备用,应避免标本间交叉污染。

2.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃,避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

15.0 μL

逆转录酶

 2.0 μL

Taq

 3.0 μL

3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

    在上述制备好的PCR反应管中分别加入处理好的待测标本RNAμl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

    根据需要,在上述准备好的PCR反应管中分别加入阴性对照品以及阳性对照品各μl,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4. PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 

 

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集 AIV-H9荧光信号

HEX通道采集 AIV-N2荧光信号

 PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

42℃:10分钟(min

1

预变性

95℃:3分钟(min

1

预扩增

95℃:5秒(s

5

55℃:40秒(s

PCR扩增

95℃:5秒(s

40

55℃:40秒(s

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct≤35

2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

1阳性:标本检测结果Ct≤35或有明显指数增长期。

2)可疑:标本检测结果Ct值在3538范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在3538范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】

通道及检测结果

标本检测结果解释

FAM

HEX

+

+

样本中检测出AIV-H9和AIV-N2

+

-

样本中检测出AIV-H9,未检测出AIV-N2

-

+

检测出AIV-N2,未检测出AIV-H9。

-

-

未检测出AIV-H9和AIV-N2。

【检验方法的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的检出限时可能会发生假阴性的结果。

2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 产品的检出限为10Copies/mL,产品CV≤5%

 



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