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鸡传染性支气管炎检测试剂盒使用步骤

产品型号:

厂商性质:生产厂家

访问量:27

更新时间:2020-06-19

简要描述:

检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原

详细说明:

鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒

用途
该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中浓度。
 
 

检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,抗原浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
 

反应类型

夹心法

规格

96T

反应时间

4.5h

反应性

通用

检测方法

Colormetric

灵敏度

检测下线除以10

样本体积

100μL

样本类型

血清、血浆或其他相关生物液体

特异性

可检测样本中的指标,且与其它相关蛋白无明显交叉反应

重复性

板内,板间变异系数均<10%

 
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测指标活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
组织匀浆:1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀后检测。
注意:样品被稀释了50倍!
 
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

 

批内变异系数

批间变异系数

样本

1

2

3

1

2

3

数量

20

20

20

20

20

20

平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL)

0.41

1.07

4.96

0.47

1.25

4.24

标准差

0.02

0.05

0.22

0.03

0.06

0.2

变异系数 (%)

4.88

4.67

4.43

6.38

4.8

4.72

 
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。

样本类型

回收率范围 (%)

平均回收率 (%)

血清(n=5)

94-110

102

血浆(EDTA)(n=5)

90-102

96

细胞上清(n=5)

95-106

98

 
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。

 

 

血清(n=5)

血浆(EDTA)(n=5)

细胞上清(n=5)

1:2

回收率范围(%)

99-108

95-105

92-104

平均回收率(%)

105

102

97

1:4

回收率范围(%)

95-109

90-100

97-105

平均回收率(%)

102

96

100

1:8

回收率范围(%)

89-103

89-104

96-108

平均回收率(%)

97

97

102

1:16

回收率范围(%)

88-102

98-108

92-105

平均回收率(%)

94

104

100

 
试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

说明书

1

1

封板膜

2

2

密封袋

1

1

酶标包被板

1×48

1×96

标准品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

酶标试剂

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

终止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

20×浓缩洗涤液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

说明书

1

1

封板膜

2

2

密封袋

1

1

说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。
 
 

操作步骤
1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 

试验所需自备物品
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水
4. 吸水纸

 



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