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培养基的选择及更换

发布时间:2020-05-28   点击次数:99次
 尽管绝大多数细胞系都可以在不止一种培养基内生长,客户既可以选用来自不同供应商的商品化培养基,也可以使用自行配制的培养基。但是,值得注意的是,来自不同供应商的培养基,即便是拥有类似甚至相同的名称,配方及培养细胞的性能等方面也不尽相同。而自行配制的培养基,虽然成本很低,但是一方面配制比较繁琐,费时费力。另一方面,配制完全培养基所需要的基础培养基、细胞添加因子、血清等原材料极有可能存在批次间的差异,很难保证不同批次完全培养基的稳定性。
 
 
 
此外,任何培养条件的改变都有可能造成细胞系特性的改变。因此,为保证整个实验过程中细胞系的稳定,建议从一开始就选用推荐使用的培养基、培养基添加物等培养体系进行培养。
 
 
 
在某些特殊情况下,如确实需要更换培养基,可按照以下步骤进行操作,逐步使细胞适应新的培养基:
 
 
 
1. 以1:2的传代比例将细胞一分为二到两个新的培养皿内继续培养,其中一个培养皿作为对照,继续使用原来的培养基培养。另一个培养皿作为实验组,使用新旧培养基按照1:1配比混合后的培养基培养。
 
注意:采用相对较低的传代比例1:2进行传代,目的是缓解传代过程及新培养基给细胞生长带来的双重压力。
 
 
 
2. 分别监测两个培养皿内细胞形态、生长速率等方面的变化。如果两个培养皿内的细胞没有明显差异,则接下来仍然按照1:2的传代比例分别进行第二次传代。对照组仍然使用旧的培养基培养,而实验组则采用新旧培养基按照3:1配比混合(25% original, 75% new)后的培养基培养。
 
 
 
3. 继续监测两个培养皿内细胞形态、生长速率等方面的变化。如若两者之间无明显差异,则分别继续进行第三次传代。在第三次传代时仍然按照1:2的传代比例进行,实验组使用新旧培养基按照7:1(12.5% original, 87.5% new)配比混合的培养液培养。对照组仍使用旧的培养基培养。
 
 
 
4. 继续监测实验组和对照组细胞形态、生长速率等方面的变化。如若两者之间仍然无明显差异,则分别按照1:2的传代比例继续进行第四次传代。此时,对照组仍使用旧的培养基培养,而实验组则完全更换成新的培养基培养。此时,细胞应该已经完全适应新的培养基了。
 
注:为确认细胞是否已经完全适应新的培养基,可以分别对两组细胞进行功能性测试。如果在功能性测试过程中任何一个时候,实验组表现与对照组不同,重复步骤2、3多传几代,直至与对照组细胞完全一致。
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