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蛋白质含量检测方法概述

发布时间:2020/4/29   点击次数:104次   文件下载    

蛋白含量检测试剂盒(BCA法)

产品名称

通用名:蛋白质含量检测试剂盒(BCA法)

原理

在碱性环境下蛋白质分子中多肽键结构与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu+BCACu+特异性结合成稳定的紫色复合物,该复合物在562nm处有*的光吸收值,在一定范围内,光吸收值与蛋白质浓度成正比,溶液颜色的深浅与蛋白质含量成正比,可根据光吸收值测定蛋白质浓度。

实验试剂

试剂A     100ml   (4℃保存)

试剂B     30ml   (4℃保存)

4mg/ml BSA标准品    0.5ml   (-21℃保存)

仪器

酶标仪或分光光度计,工作波长540nm~590nm,*工作波长562nm,如无此波长,建议优先使用490nm波长

适用范围

不含还原剂的蛋白样品。

实验步骤

1. 工作液配制:将试剂A与试剂B50:1的比例混合均匀。

2. 标准品稀释:用纯化水将2mg/ml的BSA标准品依次稀释为以下浓度16008004002001005025ug/ml。注意用纯化水标记空白。

3. 参照下表上样

 

空白

标准

待测

纯化水ul

20

  

标准品ul

 

20

 

待测品ul

  

20

BCA工作液ul

200

200

200

充分混匀后,在37℃条件下孵育30分钟或室温下静置2小时。

4. 在酶标仪或分光光度计上,以562nm波长下,空白管调0后测定各管OD值。

5. 以OD值为Y轴,标准品浓度为X轴绘制标准曲线。

6. 从标准曲线上查找待测样品浓度,注意稀释后的样品所测浓度需乘以稀释倍数。

说明

1. BCA法的检测范围是20-2000ug/ml,若样本超过此范围需再酌情稀释。

2. 样本中含有还原剂,EDTA或葡萄糖浓度大于10mM时不可直接使用BCA法,样本经液体样品蛋白抽取试剂沉淀后,可彻底去除干扰物质。

3. 在37℃孵育30分钟或室温下静置2小时对检测比较便利,但严格来讲,此时反应尚未达到终点,通常每10分钟A562OD值升高约2.3%,在10分钟内测定不会影响精度。

4. 可测量吸附于固相支持物如酶标版、琼脂糖、亲和层析凝胶上的蛋白。

5. 本法仅适用于科研。

  

 

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