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鸡马立克氏病核酸试剂盒

产品型号:

厂商性质:生产厂家

访问量:890

更新时间:2020-04-09

简要描述:

​鸡马立克氏病核酸试剂盒

马立克氏病(MDV)是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病。本试剂盒利用实时荧光PCR原理,主要用于鸡马立克氏病的定性筛查检测及疗效评估有重要指导意义.

详细说明:

鸡马立克氏病核酸试剂盒

【预期用途】

鸡马立克氏病核酸试剂盒

马立克氏病(MDV)是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病本试剂盒利用实时荧光PCR原理,主要用于鸡马立克氏病的定性筛查检测及疗效评估有重要指导意义.

【检验原理】

本试剂盒针对MDV高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含MDV基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

注:阴性对照为基因组DNA,阳性对照为MDV经灭活处理的核酸提取物

【储存条件及有效期】避光-20以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.活禽样品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

(1) 咽喉拭子,采取时要将拭子深入喉头及上愕裂来回刮3次~5次,取咽喉分泌液;

(2) 泄殖腔拭子,将拭子深入泄殖腔转一圈沾取粪便;

(3) 将咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有 1.0 mL 生理盐水的离心管中备用。

2.血液或血清样品:使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。

3.肌肉或内脏样品:取少量样品(2~3克)于研钵或匀浆器中研磨,然后将研磨匀浆转入无菌离心管中,3000rpm/min 离心10分钟取上清待检。

4.应避免标本间交叉污染。

5.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数

单反液配制表(每份)

PCR反应液

17.5 μL

混合酶液(Taq酶+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

(4)盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。剩余试剂放回-20以下冰箱冷冻保存。

2.样本准备(样本处理区)

用QIAGEN、Roche公司DNA提取试剂盒提取DNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA各5μl、终体积25μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4.PCR(PCR扩增区)

(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集MDV荧光信号

PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

UNG处理

 50:2分钟(min)

1

预变性

 95:3分钟(min)

1

预扩增

95:5秒(s)

5

55:40秒(s)

PCR扩增

95:5秒(s)

40

55:40秒(s)

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None。

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。

(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。

(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

 

【预期用途】

马立克氏病(MDV)是鸡的一种淋巴组织增生性肿瘤病,其特征为外周神经淋巴样细胞浸润和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病本试剂盒利用实时荧光PCR原理,主要用于鸡马立克氏病的定性筛查检测及疗效评估有重要指导意义.

【检验原理】

本试剂盒针对MDV高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含MDV基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

注:阴性对照为基因组DNA,阳性对照为MDV经灭活处理的核酸提取物

【储存条件及有效期】避光-20以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.活禽样品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

(1) 咽喉拭子,采取时要将拭子深入喉头及上愕裂来回刮3次~5次,取咽喉分泌液;

(2) 泄殖腔拭子,将拭子深入泄殖腔转一圈沾取粪便;

(3) 将咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有 1.0 mL 生理盐水的离心管中备用。

2.血液或血清样品:使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。

3.肌肉或内脏样品:取少量样品(2~3克)于研钵或匀浆器中研磨,然后将研磨匀浆转入无菌离心管中,3000rpm/min 离心10分钟取上清待检。

4.应避免标本间交叉污染。

5.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数

单反液配制表(每份)

PCR反应液

17.5 μL

混合酶液(Taq酶+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

(4)盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。剩余试剂放回-20以下冰箱冷冻保存。

2.样本准备(样本处理区)

用QIAGEN、Roche公司DNA提取试剂盒提取DNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA各5μl、终体积25μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4.PCR(PCR扩增区)

(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集MDV荧光信号

PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

UNG处理

 50:2分钟(min)

1

预变性

 95:3分钟(min)

1

预扩增

95:5秒(s)

5

55:40秒(s)

PCR扩增

95:5秒(s)

40

55:40秒(s)

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None。

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。

(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。

(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

 



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