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禽流.感病毒H9亚型检测试剂盒
【包装规格】 25头份/盒 & 50头份/盒
【预期用途】
禽流.感病毒H9亚型检测试剂盒适用于禽.流感病毒H9亚型检测,可用于临床禽2流感感病毒H9亚型感染的辅助诊断,但不作确诊使用。
【检验原理】
禽2流感病毒H9亚型检测试剂盒针对禽2流感病毒H9亚型基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含禽流2感病毒H9亚型基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
【主要组成成份】
序号 | 组成 | 25头份/盒 | 50头份/盒 |
1 | 禽2流感H9 RT-PCR反应液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
2 | 禽2流感H9逆转录酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
3 | 禽2流感H9 Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
4 | 禽2流感H9阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | 禽2流感H9阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
6 | 说明书 | 1份 | 1份 |
注:阴性对照为禽类基因组DNA,阳性对照为失去活性的禽2流感病毒H9亚型cDNA。
【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液样本,禽肉取肌肉或内脏样本,样本处理方法参照相关文献资料。
2.样本采集后应立即检测,若不能立即检测,应置于-80℃冷冻保存,避免反复冻融,用干冰或液氮运输。
【检验方法】
1. 试剂准备(试剂准备区)
(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。
(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。
n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数
单反液配制表(每头份) | RT-PCR反应液 | 15.0 μL |
逆转录酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。
2.样本准备(样本处理区)
用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。
3.加样
在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。
注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None。【参考值(参考范围)】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。
【检验结果的解释】
通道及检测结果 | 标本检测结果解释 |
FAM | |
+ | 标本中检出禽.流感病毒H9亚型RNA |
- | 标本中未检出禽.流感病毒H9亚型RNA |
【检验方法的局限性】
1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的*检出*可能会发生假阴性的结果。
2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。
3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。
【产品性能指标】 产品的*检出限为102 Copies/mL,产品CV值≤5%。
【注意事项】
1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在第1次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
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