鸡传染性法氏囊病毒试剂盒

鸡传染性法氏囊病测试剂盒

1 抗原预包被板条 1块 7 底物B液 6ml

2 酶结合物 12ml 8 终止液 6ml

3 浓缩的抗VP2单抗 110ul 9 阴性对照 50μl

4 单抗稀释液 12ml 10 阳性对照 50μl

5 10倍浓缩洗涤液 50ml 11 封板膜 2张

6 底物A液 6ml 12 说明书 1份

​鸡传染性法氏囊病毒检测试剂盒检测鸡血清中的鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体，用于评估养鸡场鸡传染性法氏囊病疫苗免疫产生的中和抗体的状况及感染鸡的血清学辅助诊断。

需自备的设备及试剂

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸头。 量筒：500ml。 96孔板酶标仪。 蒸馏水或去离子水。 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

抗VP2单抗工作液的准备（现配现用）

先计算好单抗工作液的用量，再将101倍浓缩的抗VP2单抗按1：101的体积比用单抗稀释液稀释（例如：900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的抗VP2单抗，可以满足10个微孔的用量；每次稀释时应多稀释100μl，以避免加样时的损耗而造成液体量不足）。

注意事项

试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2～8℃。 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。 TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～8℃)。 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。 严格遵守操作说明可以获得*的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

操作步骤

取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次使用），加入待检血清10μl到检测板孔底，同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中，立即加入90μl单抗工作液，空白对照仅加入100μl单抗稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。 盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同2。切记*在干净吸水纸上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值小于或等于0.8，阴性对照孔A450值必须大于1.2。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。

VP2抗体的阳性、阴性通过计算样品与阴性对照的比值（S/N）进行判定：

如果S/N值小于0.8，样品判定为阳性。

        2.如果S/N值大于或等于0.8，样品判定为阴性。

有效期

贮存方法： 2 - 8oC下贮存。

有效期： 12个月。

法氏囊位于泄殖腔的背侧，也称腔上囊，是禽类特有的免疫器官，在70-80日龄时体积*，以后逐渐消退，性成熟时消失。该病引起雏鸡免疫抑制，故对马立克氏病和新城疫疫苗接种的反应能力下降，也使病鸡对球虫、大肠杆菌、腺病毒和沙门氏杆菌更易感，造成养鸡业的巨大损失。