猪瘟抗原检测安全试剂盒

 猪瘟抗原检测安全试剂盒

猪瘟E2（CSFV-E2）抗体ELISA检测试剂盒，可以从猪的血液样品中检测到CSFV-E2抗体的量。微量板用CSFV-E2蛋白包被，将稀释的猪血清样品加入到微量孔中，样品中CSFV-E2抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗猪IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果CSFV-E2抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的该抗体的量有关。

提供的试剂

包被板（Coated plates）：包被重组猪瘟E2蛋白抗原的微量板。

酶标二抗(Conjugate reagent)：碱性磷酸酶标记的抗猪抗体：内含蛋白稳定剂红色染料的磷酸盐缓冲液。

底物片(Substrate tablets) PNPP（4-**苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。

底物缓冲液(Substrate buffer)：含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。

终止液(Stop Solution)：含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。

样品稀释液(Sample Diluent)：含有蛋白稳定剂

洗液(Wash Buffer)：含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。

阴性对照(Negative Control)：灭活的无CSFV抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和die氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。

阳性对照(Positive Control)：含特异性CSFV抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和die氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。

材料和设备要求（试剂盒未提供）

精确的微量移液器和一次性吸头

8或12孔道的微量移液器

稀释样品的塑料管

蒸馏水或去离子水

含405nm波长的酶标仪

注意事项

1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。

2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。

3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。

4．试剂盒仅供体外使用。

5．严格按照检测规程操作才能取得较好的结果。

试剂的准备

1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到*溶解。本试剂很好是现用现配，配置好的底物溶液可以在+4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。

2．洗液：将1袋洗液*倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其*溶解。洗液可在+4℃保存1个月。

3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。

样品的准备

每个样品按照1:30稀释，即在样品稀释板上用10μl样品加290μl的样品稀释液，并在预稀释板上记录好样品和对照的位置。

1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。

2．每份样品都要换一个未用过的新的吸头。

试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！！

BioChek公司的CSFV-E2试剂盒可以通过两种方式来进行实验：一种是样品孵育过夜来提高其敏感性；另一种是孵育较少时间来进行快速诊断。

双重测试操作步骤

1．从密封袋中取出用CSFV-E2包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。

2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。

3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。

4．将100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。孵育过夜（4-8℃）来提高其敏感度。

5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。

6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。

7．重复步骤5。

8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。

9．各孔加100μl终止液，终止反应。

10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。

结果

为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.35，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。

实验室中温度的差异会造成OD值的偏高或偏低。根据实验对照的结果判定实验的有效性。

结果判定

样品中抗体的相对含量可以参考阳性对照来计算，其关系可以通过S/P值（样品和阳性对照的比值）来计算。

1．S/P值的计算

样品的S/P值大于或等于0.5认为是阳性。

2．抗体滴度的计算

Log₁₀效价＝1.1×Log₁₀S/P + 3.361

逆对数＝效价

3．判定标准

S/P值效价范围抗体状况

≤0.499    ≤1070    阴性

≥0.500    ≥1071   阳性